Microbioensayo de 72h de inhibición de crecimiento de la planta acuática superior Spirodela polyrhiza (“duckweed” o lenteja de agua). Es un microbioensayo práctico y sensible, sin necesidad de cultivo de stock de organismos, basado en la medición del área de las primeras frondas, utilizando análisis de imágenes. El kit contiene tubos con turiones que pueden ser almacenados y germinados cuando se necesite.

Cada SPIRODELA DUCKWEED TOXKIT contiene los materiales necesarios para realizar 2 bioensayos completos de inhibición de crecimiento. Se lleva a cabo en una placa de 48 pozos, con 5 concentraciones de ensayo, y 8 réplicas. El kit contiene instrucciones fáciles de seguir e ilustraciones detalladas para llevar a cabo pruebas de búsqueda de rango y definitiva. Los organismos de ensayos en el kit están en forma de turiones (yemas vegetativas durmientes) que pueden almacenarse por varios meses y germinadas cuando se necesite.

Criterio del ensayo

• El bioensayo Spirodela “duckweed” Toxkit se basa en la inhibición de crecimiento de la primera fronda de la planta después de 3 días de exposición a una serie de diluciones de la sustancia tóxica, calculándose subsecuentemente la CE50 de 72h. El crecimiento se determina midiendo el área de la primera fronda al inicio (t0h) y al final (t72h) del bioensayo con un programa de análisis de imágenes.

Reproducibilidad

• Turiones de alta calidad se producen en condiciones estrictamente controladas, evitando variabilidad asociada con la colecta y mantenimiento de stock vivo, como en bioensayos convencionales con especies similares.
• Se logra una calidad alta y uniforme de los medios de crecimiento y dilución, simplemente diluyendo soluciones madre de medio Steinberg, en agua desionizada.
• Se aseguran condiciones de exposición uniformes utilizando recipientes de ensayos (microplacas) estandarizados, fabricados de materiales biológicamente inertes.
• Se describe en detalle un ensayo de control de calidad con una sustancia química de referencia, para asegurar precisión y reproducibilidad.

Costo beneficio

• Los turiones durmientes puede germinarse cuando sea necesario, evitando la necesidad y el costo de cultivo continuo de stock de organismos de ensayo.
• Se requiere de muy poco equipo de laboratorio para realizar el bioensayo: una incubadora (o habitación climatizada) con iluminación y cristalería básica.
• La vida de anaquel de los turiones se garantiza por varios meses cuando se almacenan adecuadamente, reduciendo limitaciones en la programación del laboratorio.

Contenidos

• Tubos con turiones durmientes, soluciones madre del medio de crecimiento y de dilución, recipientes para germinación y para ensayo y espátulas para transferir los turiones germinados a la placa de ensayo.
• Procedimiento estándar operacional detallado, procedimiento resumido y hojas para anotar y analizar los resultados.
• Hoja de especificaciones con el número de lote de los turiones y de las soluciones madre, y la CE50 de 72h con la sustancia de referencia cloruro de potasio (KCl) para pruebas de control de calidad.

Amigable al usuario

• Manejo y punteo simple, pudiéndose manejar múltiples ensayos simultáneamente.
• El tiempo total para realizar el ensayo y medir las áreas es de menos de 3 horas.
• Las mediciones de área de las primeras frondas (en una fotografía almacenada) pueden posponerse y realizarse cuando sea adecuado.
• A solicitud del usuario, se puede proporcionar una hoja de cálculo de Excel para realizar fácilmente el tratamiento de datos y calculo de la CE50 de 72h. 

Sensibilidad

• La sensibilidad de este bioensayo es comparable con la del bioensayo convencional con Lemna sp.

Validación

• Los bioensayos con este tipo de plantas acuáticas se usan en muchos laboratorios en el mundo para evaluar la toxicidad de muestras ambientales o sustancias químicas.
• La precisión del microbioensayo estandarizado Spirodela Toxkit se determinó en una comparación internacional interlaboratorios, con la participación de más de 50 laboratorios de 20 países.
• De este ejercicio se seleccionaron varios criterios de validez para el bioensayo Spirodela Toxkit.

SPIRODELA DUCKWEEK TOXKIT F es una marca registrada de MicroBioTests, Inc., Mariakerke (Gent), Bélgica.